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茶氨酸生物合成工程菌构建
2021-02-22 15:32:59热度:123°C
通过PCR扩增E．coli DH5a的γ-ggt基因，产物经纯化后用Kpn I和Xho I双酶切，回收γ-谷氨酰转肽酶基因目的片断，并与经相同双酶切的表达载体pET-32a连接，得到重组质粒pET-GGT。将重组质粒转化到E．coli BL21中，获得工程菌。工程菌株经0．05mol／L IPTG，32℃诱导表达，湿菌体的酶活达到2．0U／g，大约是出发菌株E．coli DH5a的15倍。工程菌催化L-谷氨酰胺和盐酸乙胺反应生成
茶氨酸的产量达到29．40g/L，L-Gln的转化率为48．22％，其催化L-谷氨酰胺和盐酸乙胺反应生成茶氨酸的能力比出发菌株E．coli DH5a提高了100多倍。
完成机构：农业部茶叶化学工程重点实验室、中国农业科学院茶叶研究所,浙江杭州310008
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